Expansion to 24 well
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Cloningの翌日以後、12時間おきに行う。
- 48wellを顕微鏡でcheckして、移せるものに○をする。12時間後に移すものに・。以後△、□、◇、▽などとマークしてゆく。
- 24wellのfeeder入りdishを2枚準備(1枚はFreeze用、1枚はDNA用)。
- Numbering (Freeze用は黒、DNA用は赤)。側面にふたと身にまたがるように線を引き、ふたが外れたときに対応できるようにする。
- Freeze用plateにESM 340μlずつ、DNA用plateにESM(期限切れでOK)を180μl入れておく
- マークしたwellを5ml pipetのPBS 適当量でwash
- 80μl trypsin, 37℃ 2min
- 400μl ESMを入れていく
- 320μlにpipetmanを合わせて15回ほどsuspend
- 320μlをサザン用のplateに、残り(〜160μl)をストック用に入れる。
96wでサザンを行うときは、96w gelatin coat / 24w feeder layer / 24w gelatin coatにそれぞれ
160μlずつ分ける。
- 最初のうちはsuspendの具合をcheckする
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